将低温保存作为定义输入而非变量进行验证
大多数早期细胞治疗项目仍然依赖于新鲜的起始材料，尤其是在预处理阶段。临床和一期研发。这种依赖往往是由习惯而非数据驱动的。新的工作流程是熟悉的，但它们也将可变性嵌入了最早期的实验中，而这些实验的可重复性日后是最难恢复的。随着开发压力的增加，团队开始寻找在不引入新的未知因素的情况下稳定输入的方法。
冷冻保存经常被视为未知因素之一。对冷冻后 –解冻存活率或细胞行为的改变影响了冷冻材料被谨慎采用的方式，即使项目正在与新鲜工作流程固有的多变性作斗争。人们往往忽视的是，这些问题与其说源于冷冻本身，不如说源于冷冻保存的方式。一个定义不清的流程会留下太多的变数。而经过验证的流程则不会。
这种区别很重要，因为可重复性取决于已证明的行为，而不是假设。当冷冻起始材料是通过经过验证的标准化低温保存过程制备时，其特性如后 –解冻恢复能力、存活能力和功能性能并不是一个悬而未决的问题。它们是材料的既定特性。这种保证使冷冻保存不再是一个隐藏的变量，从而可以放心地使用冷冻投入品。
IntegriCell®就是围绕这一原则设计的。而不是在早期 –Cryoport Systems 提供了一种自动化、封闭式的冷冻保存流程 (ACP)，该流程已经过科学验证并实现了标准化（在从新鲜阶段过渡到冷冻阶段时支持可比性研究）。对于开始采用冷冻起始材料的项目来说，这将冷冻保存从一种可感知的风险转变为一种可控、可辩护的输入，从一开始就支持可重复性。
可重复性取决于行为相同的输入
早期研发中的可重复性通常被认为是过程控制的一项功能。化验的稳健性、操作人员的培训、设备的合格性……这些方面都受到关注，因为这些项目都在努力减少实验结果中的噪音。然而，起始材料经常被视为一个给定的变量，而不是一个需要同样定义的变量。这种假设只有在每次使用材料时，材料本身的表现都一致的情况下才会成立。
当起始材料定义不清时，变异性就会在研发后期浮现（通常是在根据早期数据得出结论之后）。随着试验的扩大，起始材料的变异性也很容易出现，特别是在新鲜的白细胞分离材料需要更多时间才能到达生产地点的情况下，收集地点的变异性就会因收集方法或距离略有不同而产生。如果不清楚如何将起始材料标准化，团队可能会发现自己只是在猜测而不是评估变异的根本原因。
低温保存可以让初始材料停止计时，消除常见的变异源（如从采集到制造的时间，这会影响细胞的活力和恢复）。但至关重要的是，这个经常用于消除变异性的步骤不能引入新的变异性来源。低温保存将多个工艺决策集中到一个步骤中，而每个决策都会影响解冻后的行为。如果没有在经过验证的框架内始终如一地进行低温保存，冷冻状态可能会成为新的不确定性来源，而不是稳定性来源。
经过验证的冷冻保存改变了这种动态变化。当低温保存过程经过科学鉴定并证明能产生一致的解冻后性能时，冷冻材料的行为就不再是推断的，而是已知的。细胞的恢复能力、存活率和功能属性成为输入的确定特征，而不是需要为每个样本重新确定的变量。
将冷冻保存作为一个经过验证的过程（而不是一个程序步骤），可将冷冻起始材料与其他受控投入品归为同一类别。它为材料的行为建立了明确的预期，消除了下游解释的模糊性。在数据密度有限、决策进展迅速的早期研发中，这种清晰度非常重要。
应利用而非重复验证
对于早期项目和刚刚开始感受到规模压力的项目来说，验证往往是一种隐性负担。尤其是在时间紧迫、数据生成是当务之急的情况下，难以证明合理性的大量内部研究和资源变得难以驾驭。因此，包括低温保存在内的核心生产工艺之外的工艺往往没有得到充分的验证，直到变异性迫使人们提出这个问题。
这种方法假定验证必须在内部进行才有意义。实际上并非如此。当低温保存流程已经过科学验证、记录并证明能产生一致的结果时，早期项目就可以采用这些现有（经过验证的）工作流程，而无需自己承担定义流程的工作。而对于那些正在进行中期转变，将采集与生产分离的项目来说，可比性研究很容易到位，以验证现有结果在特定项目中是真实的，而不仅仅是在概念上。
对于在临床前和第一阶段工作的团队来说，可重复性在很大程度上取决于限制与实验输入相关的开放性问题的数量。如果采用的冷冻保存方法是临时性的，存在研究地点之间的差异，或者仍在优化或调整之中，那么团队的很大一部分精力就会转移到对保存步骤的理解上。
像 ACP 这样经过验证的流程，可以在分布式收集环境中实现难以达到的一致性。随着项目规模的扩大，采集点也会随之增加，采集和处理条件以及转运时间也会随之发生变化。即使目标一致，执行起来也会因地而异，尤其是在预期采集时现场处理低温保存的情况下。现场的流程或设备可能略有不同，在某些情况下，不同操作员的处理方式也可能不同。利用经过验证的标准化低温保存方法，每次都以相同的方式进行处理，就能使起始材料的表现具有可预测性，而不受采集地点或专业护理人员的影响。
这时，有效的冷冻保存就不再是一个技术细节，而是一种结构优势。团队无需再询问冷冻过程是否改变了细胞，而是可以在清楚了解已经确定的解冻后行为的基础上继续开展工作。冷冻保存成为支持开发和规模化的受控基础的一部分。
是什么让经过验证的冷冻保存工艺可以转让
并非所有的验证对早期开发团队都同样有用。例如，在早期条件下验证过的方法，如果随着时间的推移进行了调整，那么随着条件的变化，其扩展性往往会很差。采集地点或操作人员的不同会很快暴露出从未经过正式测试的假设。因此，必须从一开始就考虑到这种可变性，对可转移的冷冻保存过程进行验证。
IntegriCell 低温保存服务就是为满足这一要求而专门开发的。IntegriCell 以自动化、封闭式低温保存流程为基础，消除了工作流程中的随意执行，取而代之的是确定的、可重复的控制。自动化限制了操作人员的可变性，而封闭式系统则将难以在不同地点进行一致控制的环境因素标准化。这种方法创建了一个集中式流程，其行为可以被可靠地描述和复制。
标准化的 ISO 认证 SOP 强化了这一技术基础，这些 SOP 规定了材料从采集、低温保存到生物贮存以及在运输到制造过程中的处理方式。这些程序确保每批产品都在相同的条件下以相同的方式进行处理。在这种情况下，验证与在受控和记录条件下生成的经证实的解冻后恢复、存活率和功能性能数据直接相关。
这就把冷冻变成了一种可预测的投入，而不是一种背景风险。团队并不依赖于对冷冻概念的普遍信心。他们所依赖的是一个特定的、经过验证的过程，其结果已经确定，因此可以将冷冻的起始材料纳入其中，而不会对细胞解冻后的行为产生额外的疑问。
当项目在开发中期从新鲜材料过渡到冷冻材料时，IntegriCell 也支持可比性研究。可比性研究不是将这种转变视为重置，而是用来证明投入之间的连续性。这确保了过渡前后生成的数据仍具有科学可解释性，既保留了早期工作的价值，又使今后的投入更可控。
IntegriCell 将冷冻保存固定在一个自动化、经过验证的标准化流程中，使早期项目能够获得冷冻起始材料的优势，而不会继承通常围绕它的不确定性。验证从一开始就嵌入到流程中。
通过定义起始材料建立监管信心
监管审查取决于可追溯性和一致性。随着项目向 IND 提交，审查人员不仅要评估安全性和临床设计，还要寻找证据证明支持这些决策的数据是在充分理解和控制的输入基础上生成的，并且由此产生的假设可以合理地预期适当的扩展。他们正在寻找证据，以证明支持这些决策的数据是在充分理解和控制的输入条件下产生的，而且由此产生的假设可以合理地预期在临床开发阶段适当扩展。如果不能清楚地解释变异性，那么对早期研究得出的结论的信心很快就会开始减弱。
起始材料在评估中起着核心作用。如果没有明确界定输入材料的特征，就会出现可比性问题。经过验证的冷冻保存可加强证据支持。如果冷冻起始材料是通过标准化流程制备的，并具有既定的恢复能力、存活能力和功能表现，那么输入材料的行为就会成为已知系统的一部分。在监管互动中，必须证明不同批次和地点之间的一致性，而不是争论。如果冷冻状态本身的效果已被充分证明，则无需再进行论证。
从 IND 准备就绪的角度来看，采用经过验证的低温保存工艺可简化监管申报。起始材料不再是必须解释的潜在变异源，而是随着项目规模的扩大，成为支持一致性的受控输入。监管机构的信心来自于这种控制。当起始材料的行为被定义并可重现时，审查的重点仍然是疗法及其性能，而不是关于细胞如何保存的悬而未决的问题。
尽早建立控制以支持接下来的工作
早期的开发决策会影响到下一步的发展，在这种情况下，为适应时机或资源而做出的选择往往会产生变数或阻碍规模的扩大。起始材料也不例外。如果在程序开始时就引入了可变性，那么以后就很难再轻易解决了。
经过验证的冷冻保存为建立控制提供了一种方法，同时又不会减慢早期进度。开发团队可以依靠已定义、已证明的流程，在不引入下游不确定性的情况下加入冷冻起始材料。可重复性成为供应链的一个特点，而不是随着项目的复杂性增加而必须不断重新确立的目标。使用行为可预测的起始材料有助于保持连续性，并保留早期工作的价值。
将低温保存作为一种确定的输入进行验证，而不是将其视为一种潜在的变量，这就重塑了低温保存在研发中的作用。它能让团队专注于治疗和达到下一个里程碑，并确信进入流程的材料将按照预期表现。当这种信心通过像 IntegriCell 这样经过验证的标准化方法尽早建立起来时，随着项目的推进，不确定因素也会随之减少。
